一种基于λ噬菌体Red重组酶的同源重组系统进行基因敲除:首先构建同源交换位点(AES)，随后将其整合到特定菌株噬菌体基因组中，获得噬菌粒(phasmid);将噬菌粒导入特定菌株，获得整合有同源交换位点的重组噬菌体，经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体，对特定菌株进行染;将转染后的特定菌株涂布到含潮霉素抗性的固体培养基上，37°C培养 4-5 周，挑取单克隆，通过 PCR 等方式进行验证。

主要原理是同源重组的方法，利用同源基因序列的交换将目的基因敲除。

（1）找一个温敏型质粒；

（2）用PCR方法扩增靶向基因两侧各200bp片段，并要加上适当的酶切位点；

（3）筛选一个合适的抗性基因；

（4）将抗性标记连接与两个片段的中间，然后与温敏质粒连接；

（5）转入菌株感受态中；

（6）通过合适的抗性筛选筛选阳性工程菌株。